【佳學(xué)基因檢測(cè)】DMD肌營養(yǎng)不良患者基因檢測(cè)陰性為什么要做MLPA?

杜氏與貝克氏肌營養(yǎng)不良的征狀及其對(duì)生活的影響？

杜氏肌營養(yǎng)不良癥(DMD)和貝克肌營養(yǎng)不良癥(BMD)都是由于缺陷的地塞肌蛋白基因引起的X染色體遺傳性疾病,它們的臨床表現(xiàn)和對(duì)生活的影響有一些區(qū)別:

杜氏肌營養(yǎng)不良癥(DMD):

癥狀:通常在3-5歲時(shí)開始出現(xiàn),賊早表現(xiàn)為步行困難、肌無力、跌倒頻繁。隨著病情進(jìn)展,患兒會(huì)有效喪失行走能力,并逐步出現(xiàn)呼吸衰竭、心肌病變等癥狀。

病程:發(fā)展較快,大多數(shù)患者在青春期前就會(huì)有效喪失下肢活動(dòng)能力,20多歲時(shí)需要使用呼吸機(jī)輔助呼吸,很少能活過30歲。

生活影響:由于嚴(yán)重肌無力和并發(fā)癥,患者生活質(zhì)量極差,有效喪失獨(dú)立生活能力,需要全天候照料。教育程度和就業(yè)機(jī)會(huì)也受到很大影響。

貝克肌營養(yǎng)不良癥(BMD):

癥狀:起病年齡較晚,約在10歲左右開始出現(xiàn)輕微步態(tài)異常和肌無力癥狀。癥狀進(jìn)展緩慢。

病程:癥狀進(jìn)展緩慢,患者通?？梢圆叫兄辽俚角啻浩?有些患者直到中年才出現(xiàn)嚴(yán)重的活動(dòng)障礙。

生活影響:患者一般可以正常上學(xué)、工作,活動(dòng)受限程度小于DMD患者。但隨著年齡增長,活動(dòng)能力會(huì)逐步下降,中老年時(shí)可能需要輪椅等輔助器具。

總的來說,DMD和BMD的臨床表現(xiàn)和病情進(jìn)展速度不同,DMD對(duì)患者生活的影響更為嚴(yán)重和全面。但兩種疾病均給患者及家屬帶來沉重的生活、心理和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
 

杜氏肌營養(yǎng)不良癥(DMD)和貝克肌營養(yǎng)不良癥(BMD)患者通過基因檢測(cè)為什么會(huì)出現(xiàn)沒有找到突變位點(diǎn)的情況？

杜氏肌營養(yǎng)不良癥(DMD)和貝克肌營養(yǎng)不良癥(BMD)患者通過基因檢測(cè)有時(shí)會(huì)出現(xiàn)沒有找到突變位點(diǎn)的情況,主要有以下幾個(gè)原因:

基因突變類型的限制

DMD/BMD是由地塞肌蛋白基因(DMD)突變導(dǎo)致的,目前通用的基因檢測(cè)方法如MLPA、測(cè)序等主要針對(duì)的是基因缺失、重復(fù)和點(diǎn)突變等常見的突變類型。但少數(shù)病例可能存在一些罕見的大片段重排、深介孔突變、剪切位點(diǎn)突變等檢測(cè)漏掉的突變類型。

深部?jī)?nèi)含子突變

DMD基因結(jié)構(gòu)復(fù)雜,含有79個(gè)外顯子和一些較長的內(nèi)含子區(qū)域。如果患者存在深部?jī)?nèi)含子區(qū)域的突變,目前的檢測(cè)方法可能無法覆蓋到,導(dǎo)致漏檢。

假基因干擾

DMD基因存在高度相似的假基因DMD-DP427,兩者序列高度同源。檢測(cè)過程中可能無法區(qū)分真實(shí)基因和假基因,干擾突變檢出。

檢測(cè)技術(shù)的局限性

每種基因檢測(cè)技術(shù)在敏感性、特異性和覆蓋范圍上都有一定局限,可能存在漏檢的缺陷。因此需要結(jié)合多種檢測(cè)手段來提高檢出率。

非編碼區(qū)域突變

目前大部分檢測(cè)方法關(guān)注的是編碼區(qū)的突變,但一些調(diào)控區(qū)域如啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等區(qū)域的突變也可能影響基因表達(dá)。

總之,通過優(yōu)化檢測(cè)策略、開發(fā)新技術(shù)等措施,未來漏檢的情況還可以進(jìn)一步降低。對(duì)于沒發(fā)現(xiàn)突變的患者,也需要結(jié)合臨床表型綜合分析。

DMD肌營養(yǎng)不良患者基因檢測(cè)陰性為什么要做MLPA?

對(duì)于DMD肌營養(yǎng)不良患者基因檢測(cè)陰性的情況,需要做MLPA檢測(cè)的主要原因有:

發(fā)現(xiàn)大片段缺失/重復(fù) DMD基因范圍很大,約2400kb,傳統(tǒng)的測(cè)序方法可能漏檢較大片段的缺失或重復(fù)突變。而MLPA能夠高靈敏度地檢測(cè)出長度在1kb至數(shù)百kb的缺失或重復(fù),這類突變約占DMD病例的60%-65%。

規(guī)避DMD偽基因干擾

DMD基因存在高度同源的DMD-DP427偽基因,雙方序列同源性達(dá)98%以上。在測(cè)序或其他檢測(cè)過程中,可能產(chǎn)生偽基因的干擾。MLPA則通過設(shè)計(jì)特異性探針,能夠正確區(qū)分真實(shí)基因和偽基因序列。

克服測(cè)序深度不足問題

對(duì)于整個(gè)DMD基因進(jìn)行高覆蓋度測(cè)序成本較高。而MLPA成本較低,能以較低費(fèi)用完成對(duì)編碼區(qū)的全覆蓋檢測(cè),不易漏檢。

方便產(chǎn)前診斷追蹤

如果通過MLPA確定了DMD患者存在某個(gè)特定缺失/重復(fù)突變,在產(chǎn)前診斷時(shí),重新使用相應(yīng)的MLPA試劑盒就可以快速追蹤胎兒是否攜帶同樣突變。

與其他技術(shù)互補(bǔ)

MLPA可與測(cè)序等其他檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合,彌補(bǔ)各自的不足,從而提高DMD基因檢測(cè)的整體靈敏度和特異性。

總之,MLPA能夠高效、經(jīng)濟(jì)地檢測(cè)出DMD大片段缺失/重復(fù)突變,規(guī)避偽基因干擾等,是DMD基因診斷的有力補(bǔ)充手段。